尊龙凯时提供的大鼠肺泡巨噬细胞NR8383培养说明书，旨在帮助研究人员有效地培养和处理细胞。以下是详细的细胞培养条件和操作步骤。

一、细胞培养条件

细胞名称：大鼠肺泡巨噬细胞NR8383

生长特性：贴壁与悬浮混合生长

冻存条件：使用无血清冻存液（货号：C7001）

培养体系：F12K培养基 + 20% FBS + 1% P/S

传代方法：首次推荐1:2传代，2天后更换培养液

备注：悬浮细胞需离心收集，贴壁细胞依照贴壁方法处理。

二、细胞开启后处理

收到细胞后，应立即培养至良好状态，灌满培养液并密封瓶口，这是运输细胞的最佳方式。在操作前，用75%酒精对细胞瓶进行消毒，并在超净台内严格遵循无菌操作。将细胞瓶放入37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，使细胞稳定后再进行后续处理。显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片以备后续跟踪。

首次传代时，建议使用一瓶原瓶的完全培养基，同时使用另一瓶自配的完全培养基进行对比培养，换液后请松开瓶盖。

三、细胞培养步骤

a、细胞传代

若细胞汇合度未超过80%，请将培养液收集至离心管中，留5ml完全培养基，并继续放入37℃、5% CO2孵箱；若超过80%，则需进行传代。

对于贴壁细胞的传代：1）弃去培养上清，利用不含钙、镁离子的PBS清洗细胞1-2次；2）添加0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞消化状态，若细胞变圆并脱落，请迅速停消化；3）吸出悬液并转移至离心管，离心后重悬细胞；4）按1:2的比例分瓶传代，补充新培养基至5-8ml/瓶。

对于悬浮细胞的传代：可选择收集细胞离心或半数换液，具体步骤同上述描述。

b、细胞冻存

（1）当细胞覆盖T25培养瓶80%时，请清洗一次；（2）添加胰蛋白酶消化液，待细胞回缩后加完全培养液终止消化，转移至离心管中并进行离心；（3）弃上清后加入无血清冻存液，混匀后转移至冻存管；（4）将冻存细胞放入-80℃冰箱，待24小时后可转入液氮罐中。

c、细胞复苏

（1）从液氮中取出冻存管，快速在37℃水浴中解冻，消毒外壁；（2）将细胞移至离心管中，进行离心；（3）重悬后接种至T25培养瓶，继续在37℃、5% CO2环境中培养。第二天更换新鲜培养基。

四、注意事项

在运输过程中，细胞可能会因为贴壁不牢而脱落，若脱落较多，应收集培养液并进行离心处理。若操作不当，建议按照步骤进行处理并按比例传代。

五、售后条款

如细胞出现问题，可重发的情况包括运输过程中问题、细胞污染等；不予重发的情况则包括客户操作不当或使用不建议的培养体系等。请确保在收到细胞后及时进行检查并反馈相关情况。

通过尊龙凯时提供的标准化操作流程及售后保障，您将能够安全而高效地进行大鼠肺泡巨噬细胞NR8383的培养和应用。