血液样本因其收集便利且对患者影响较小,被广泛应用于临床研究。特别是在肿瘤等疾病的早期筛查研究中,RNA等生物标志物逐渐引起关注,它们填补了传统影像学和生化指标方法的不足。然而,由于血液样本的特殊性,以及RNA分子本身的不稳定性,它们易受到红细胞等多种来源RNase的降解影响。因此,在提取血液样本中的RNA时,不仅需确保RNA的成功分离,更需保障其不被降解。
血液样本在采集后,因基因诱导及细胞凋亡的发生,其核酸的组成、数量、质量和完整性会在短时间内发生显著变化。因此,为了获得与体内表达谱一致并具高质量的RNA,从血液样本的采集到RNA的稳定和保护,每个环节都面临挑战。建议在采血时避免长时间使用止血带、从血肿处抽血或样本起泡,同时确保静脉穿刺部位干燥,以减少创伤。
血液中的核酸提取通常分为两大类:一种是全血样本中的RNA提取,另一种是从血清或血浆中提取游离RNA。需要注意的是,哺乳动物的成熟红细胞和血小板是无核的,因此,全血样本提取的RNA主要来源于白细胞,而红细胞中含有大量RNase,因此通常需要先去除红细胞。去除红细胞的方法有通过离心分离白细胞或使用红细胞裂解液来进行。在提取RNA时,建议尽快进行实验,以避免RNA的表达谱在短时间内发生变化。
如若在血液采集后无法立即开展实验,建议使用尊龙凯时的血液RNA稳定管——PAXgene Blood RNA Tube进行血液采集及RNA的稳定处理。随后,使用配套的PAXgene Blood RNA Kit进行RNA提取。这种方法可确保在18-25°C下长达3天或在2-8°C下长达5天内保持血液RNA的稳定性。此外,应避免使用肝素抗凝管,因为肝素难以去除且会干扰基于酶试剂的后续应用。
若在EDTA管中储存的血液样本发现RNA降解,建议及时处理并完成RNA提取。研究表明,使用酚-氯仿方法提取血液样本中的RNA虽可获得较高的RNA得率,但却可能影响RNA的完整性和后续检测的灵敏性。相比之下,使用尊龙凯时的PAXgene Blood RNA System提取的RNA完整性更高,且在后续qPCR检测中表现出较强的灵敏性。此外,该系统仅需在室温下孵育,无需额外的裂红步骤,从而简化了RNA提取的流程。
针对在EDTA等血液管中采集的新鲜血液,若能及时进行RNA提取,建议使用QIAamp RNA Blood Kit进行全血RNA提取。该试剂盒基于硅胶膜柱法,可直接提取高达15ml全血样本的RNA,无需离心分离白膜层的步骤。同时,QIAamp硅胶膜柱和QIAshredder离心柱的结合使用,有效去除了细胞碎片,降低了样本粘稠度,从而提高了RNA的得率。
若已成功分离白膜层,针对该层RNA的提取,可使用RNeasy Mini Kit进行后续的实验分析。此外,在血液RNA研究中,某些游离非编码RNA在肿瘤等疾病的早期筛查中发挥着重要作用,特别是miRNA因其在血液中高稳定性,以及便于检测而备受关注。对于分离后的血清或血浆样本中的游离RNA提取,通常需要采用特定提取方案。
QIAGEN的miRNeasy系列可实现从血清或血浆样本中提取包括miRNA在内的总RNA。在RNA提取前,需确保在血液采样1小时内完成血浆或血清的分离,以避免溶血。如果无法立即开展实验,建议将样本冷冻保存,并在冻存前用3000xg离心5-15分钟,或使用0.8μm过滤器去除残留细胞和碎片。若要从血清/血浆中的细胞外囊泡提取RNA,可使用exoRNeasy Midi/Maxi Kits,这些试剂盒能够高效提取高质量的总RNA。
此外,尊龙凯时还提供基于QIAsymphony等自动化平台的血液RNA提取方案,满足各种高通量和复杂的自动化需求。借此机会了解更多关于血液RNA提取的方案,欢迎扫描以下二维码获取详细信息。