目前，慢性疼痛的治疗药物效果普遍偏低，且伴随明显的副作用，因此开发替代治疗方法已成为迫切需求。尽管已有研究调查了多种疼痛相关的可溶性介质，如神经递质、细胞因子、趋化因子和小肽，但关于细胞外囊泡（EV）的研究仍显不足。EV是由细胞释放到细胞外环境中的异质囊泡，能够在细胞间转移分子，从而影响受体细胞的功能。

为探索小鼠血清来源的sEV在疼痛调节中的短期与长期作用，本研究使用Apogee纳米流式仪对sEV特征和来源蛋白质进行了综合分析。我们将幼稚型（naïve）对照或神经损伤（SNI）模型的雄性供体小鼠的sEV注射到naïve雄性受体小鼠侧脑室中，结果显示这些sEV在短期内显著提高基础机械阈值。

在长期作用的研究中观察到，在诱导疼痛模型前两周，单次预防性注射sEV可加速弗氏完全佐剂（CFA）注射后炎症性疼痛的恢复。通过细胞术分析检测脊髓和背根神经节的免疫细胞群变化，发现CFA注射后14天免疫细胞群显著变化，流式细胞术进一步确认sEV处理小鼠脊髓中CD206+巨噬细胞的增加。

总体而言，这些研究证明sEV能够通过多种机制减轻疼痛。除了NTA技术外，我们还运用了Apogee纳米流式仪对sEV进行了详细表征，尽管未使用建模算法将光散射强度转换为标准单位，本研究基于参考珠的相对光散射强度进行了估计。检测到的囊泡光散射强度范围为≥83nm至480nm，即聚苯乙烯珠或1300nm硅珠。大部分囊泡的光散射强度在83-110nm的聚苯乙烯珠范围内可被检测到。为确认囊泡的脂质膜组成，样品用Triton处理以检测其溶解性。

在剂量反应研究中，低剂量（1µg）sEV未能改变基础机械疼痛阈值，而更高的10µg剂量却出人意料地提高了这一阈值。具体而言，雄性naïve或SNI供体鼠来源的10µg sEV在注射后3小时和1天显著增加了受体小鼠的基础机械阈值。然而，10µg sEV对热敏感性并没有显著影响。

我们接着研究了naïve对照组和SNI模型小鼠的sEV如何调节SNI模型受体小鼠的疼痛。在SNI手术前两周对受体小鼠进行sEV或PBS的鞘内注射，结果显示，与PBS对照组相比，naïve小鼠的10µg sEV在SNI手术后1天能增加机械阈值，SNI模型供体的sEV则在手术后3天提高了受体小鼠的机械阈值。sEV预处理并未阻止SNI模型的机械超敏反应，但在初始阶段，sEV对疼痛超敏反应的发展有所延迟，一旦进入第三天后，差异便不再显著。

结论：本研究表明，鞘内注射小鼠血清中的sEV能诱导naïve受体小鼠产生短期的机械性抗疼痛效应。受体小鼠基础机械阈值的增加可被纳曲酮阻断，而亮氨酸脑啡肽（leu-enkephalin）作为sEV的运载物质，表明这种短期的机械性抗痛效应由阿片信号介导。来自小鼠血清的sEV有助于缓解受体小鼠的炎症性疼痛，为探索新的疼痛管理策略打下了基础。

本研究强调需采用多种方法监测免疫细胞变化，不同的组织消化和控制策略可能导致不同的结果。这些发现为未来研究免疫细胞亚型敲除小鼠奠定了基础，以验证其在sEV介导的炎症性疼痛缓解中的作用。不同性别的sEV中免疫标记的存在，可能赋予了sEV性别特异性的免疫调节功能，潜在地模拟起源细胞的生物学特性。此外，我们不能排除阿片信号的差异，无论是来自供体的sEV，还是由sEV货物内源性诱导的，都可能对炎症性疼痛背景下的免疫细胞群产生持久影响。

在此，我们感谢尊龙凯时为本研究提供的技术支持，期待未来在生物医疗领域的进一步合作与发展。